Spécificités génétiques de la maladie de Willebrand en Martinique / Marie-Daniela Dubois ; sous la direction de Rémi Nevière et de Olivier Pierre-Louis

Résumé / Abstract : La maladie de Willebrand (VWD) est le trouble hémorragique héréditaire le plus courant causé par des défauts quantitatifs ou qualitatifs du facteur Willebrand (VWF). La VWD est classé en trois types : VWD de type 1 (déficiences quantitatives partielles), VWD de type 2 (défauts qualitatifs) et type 3 (déficit complet de VWF). Le diagnostic de la VWD est basé sur la symptomatologie, les tests biochimiques et génétiques. Le but principal de cette thèse visait à déterminer les caractéristiques génotypiques et phénotypiques d’une cohorte de patients atteints de VWD en Martinique. Des variants génétiques, principalement sous forme hétérozygotes, ont été détectés chez 61 patients. Au total, 46 variants différents ont été détectés comprenant 35 variants faux-sens (76,1 %), 1 petite délétion (2,2 %), 3 décalages du cadre de lecture (6,5%), et 7 variants synonymes (15,2%). La répartition des types de VWD était : 15,2 % de type 1, 80,3 % de type 2 (2A (63,7%)> 2M (10,6%)> 2N (3%) ≥ 2B (3%)), 1,5 % de type 3, et 1,5 % de type indéterminé. Nous avons examiné les conséquences fonctionnelles et les mécanismes pathomoléculaires sous-jacents de deux variants de décalage du cadre de lecture p.(Pro2145Thrfs*5) et p.(Cys2216Phefs*9). Des expériences d'expression transitoire dans des cellules HEK293T ont démontré que les deux variants altéraient fortement la sécrétion du VWF. Bien qu’ils soient tous deux situés dans le domaine D4 du VWF, qui englobe le site de liaison à ADAMT13, ces variants ont des effets totalement différents. L'expression hétérozygote de p.(Cys2216Phefs*9)-rVWF (recombinant) a conduit à la sécrétion presque exclusivement de rVWF de type sauvage, qui était capable de se lier aux différents ligands du VWF. À l’inverse, le (Pro2145Thrfs*5)-rVWF a des effets pléiotropes sur le VWF, car il affectait la liaison du VWF au collagène III, à la GpIIb/IIIa, à ADAMTS13 et la capacité du VWF à former des structures multimériques. Le diagnostic précis de la VWD en Martinique est d'une importance primordiale car le traitement varie selon le type de VWD. Les complications hémorragiques chez les femmes en âge de procréer sont les plus fréquentes lorsque les taux du test de cofacteur de la ristocétine du Willebrand et les taux de facteur VIII sont <50 UI/dL.

Résumé / Abstract : Von Willebrand disease (VWD) is the most common inherited bleeding disorder caused by quantitative or qualitative defects in von Willebrand factor (VWF). VWD is classified into three types : VWD type 1 (partial quantitative deficiencies), type 2 (qualitative defects) and type 3 (complete deficiency of VWF). The diagnosis of VWD is based on symptomatology, biochemical and genetic tests. The main goal of this thesis was to determine the genotypic and phenotypic characteristics of a cohort of VWD patients in Martinique.Genetic variants, mainly in heterozygous form, were detected in 61 patients. A total of 46 different variants were detected, including 35 missense variants (76.1%), 1 small deletion (2.2%), 3 frameshifts (6.5%) and 7 synonymous variants (15. 2%). The distribution of VWD types was as follows: 15.2% type 1, 80.3% type 2 (2A (63.7%) > 2M (10.6%) > 2N (3%) ≥ 2B (3%)), 1.5% type 3 and 1.5% of indetermined type. We examined the functional consequences and underlying pathomolecular mechanisms of two frameshift variants p.(Pro2145Thrfs*5) and p.(Cys2216Phefs*9). Transient expression experiments in HEK293T cells demonstrated that both variants strongly impaired VWF secretion. Although both variants were located in the same D4 domain that spans the ADAMT13 binding site, these variants had entirely different effects. Heterozygous expression of p.(Cys2216Phefs*9)-rVWF led to the secretion of wild-type rVWF almost exclusively, a form that was able to bind to the different VWF ligands. Conversely, (Pro2145Thrfs*5)-rVWF displays pleiotropic effects on VWF, as it affected the binding of VWF to collagen III, to GpIIb/IIIa, to ADAMTS13 and the ability of VWF to form multimeric structures.Accurate diagnosis of VWD in Martinique is of paramount importance as treatment varies depending on VWD type/subtype. Bleeding complications in women of childbearing age are more common when VWF ristocetin cofactor levels and factor VIII levels are <50 IU/dL.