Principales cibles d’intérêt pour le développement d’un vaccin prophylactique ou thérapeutique contre le virus d’Epstein-Barr : focus sur la glycoprotéine gB / Vincent Jean-Pierre ; sous la direction de Raphaële Germi

Date :

Type : Livre / Book

Type : Thèse / Thesis

Langue / Language : français / French

Infections à virus d'Epstein-Barr -- Vaccination

Virus d'Epstein-Barr

Mononucléose infectieuse

Cancer

Glycoprotéines

Anticorps neutralisants

Protéines de fusion virale -- Dissertation universitaire

Latence virale -- Dissertation universitaire

Classification Dewey : 615.1

Germi, Raphaële (1972-.... ; pharmacienne et biologiste) (Directeur de thèse / thesis advisor)

Gigou-Cornet, Murielle (1965-.... ; médecin et microbiologiste) (Président du jury de soutenance / praeses)

Université Grenoble Alpes (2020-....) (Organisme de soutenance / degree-grantor)

Résumé / Abstract : La primo-infection symptomatique par le virus d’Epstein-Barr (EBV) correspond à la mononucléose infectieuse et 1,5% des cancers dans le monde seraient imputables à la persistance de ce virus. Cependant, aucun traitement efficace ou vaccin anti-EBV n'est actuellement disponible. La connaissance des protéines et des mécanismes impliqués dans les différentes étapes du cycle viral est essentielle pour le développement de vaccins efficaces. Ce travail décrit les principales protéines impliquées dans l'entrée du virus dans les cellules B et les cellules épithéliales qui sont des cibles d'intérêt pour le développement de vaccins prophylactiques visant à prévenir l'infection virale. Il résume également le rôle des différentes protéines impliquées dans le cycle de latence et dans le cycle lytique de l’EBV, ces dernières présentant un intérêt pour le développement de vaccins thérapeutiques dont l'objectif est de stimuler l’immunité cellulaire T contre les cancers associés à l'EBV. Notre étude expérimentale s’est focalisée sur la glycoprotéine gB, protéine de fusion encore peu étudiée qui est pourtant essentielle à l’entrée du virus dans les cellules. Afin d’explorer les réponses anticorps contre la gB dans sa forme pré-fusionnelle (cible de la neutralisation), nous avons construit des mutants de gB, décrits par Garcia et al. comme étant mieux exprimés à la surface des cellules que la gB sauvage (gBWT). L’utilisation de l’anticorps anti-gB murin 5B2 (et de sérums humains séropositifs pour l’EBV) dans des expériences d’immunofluorescence cellulaire, a montré que le mutant gB781 était plus fortement exprimé que la gBWT et que les autres mutants de gB, comme montré par Garcia et al. avec un autre anticorps anti-gB commercial murin (CL55). Par ailleurs, nos résultats confirment la présence d’anticorps anti-gB dans les sérums de patients EBV + et dans des spécialités d’immunoglobulines humaines polyvalentes. Aussi, nous avons montré que plus un sérum présentait un taux élevé d’IgG anti-VCA (mesuré avec les tests sérologiques de routine) ou un taux élevé d’IgG anti-gB (mesuré expérimentalement avec la construction gB825), plus son titre en anticorps neutralisants (évalué par la dilution inhibitrice 50% : DI50) était élevé. Ces résultats préliminaires suggèrent que les anticorps anti-gB présents dans les sérums sélectionnés pourraient en partie être responsables de l’activité neutralisante. Le système d’expression de gB que nous avons mis au point ainsi que les tests de séroneutralisation de l’infection à EBV, pourront nous aider à analyser les réponses anticorps de patients atteints de maladies associées à l’EBV et à isoler des anticorps monoclonaux dirigés contre cette protéine.

Résumé / Abstract : Symptomatic primary infection with the Epstein-Barr virus (EBV) corresponds to infectious mononucleosis and 1.5% of cancers worldwide are attributable to the persistence of this virus. However, no effective treatment or vaccine against EBV is currently available. Knowledge of the proteins and mechanisms involved in the different stages of the viral cycle is essential for the development of effective vaccines. This work describes the main proteins involved in the entry of the virus into B cells and epithelial cells that are targets of interest for the development of prophylactic vaccines to prevent viral infection. It also summarizes the role of different proteins involved in the latency and lytic cycle of EBV, that are targets of interest for the development of therapeutic vaccines aimed at stimulating T cell immunity against EBV-associated cancers. Our experimental study focused on the gB glycoprotein, a fusion protein which is essential for the entry of the virus into cells. In order to explore antibody responses against gB in its pre-fusion form (target of neutralization), we constructed gB mutants, described by Garcia et al. as being better expressed on the cell surface than wild type gB (gBWT). Using the murine anti-gB antibody 5B2 (and EBV seropositive human sera) in cell immunofluorescence experiments, we showed that the gB781 mutant was more highly expressed than gBWT and other gB mutants, as shown by Garcia et al. with another commercial murine anti-gB antibody (CL55). Furthermore, our results confirm the presence of anti-gB antibodies in sera of EBV + patients and in human polyvalent immunoglobulin medicines. Also, we have shown that the higher the anti-VCA IgG level (measured with routine serological tests) or the higher the anti-gB IgG level (measured experimentally with the gB825 construct), the higher the neutralizing antibody titer (assessed by the 50% inhibitory dilution: ID50). These preliminary results suggest that the anti-gB antibodies present in the selected sera may be partly responsible for the neutralizing activity. The gB expression system that we have developed, together with EBV infection seroneutralization assays, may help us to analyze antibody responses of patients with EBV-associated diseases and to isolate monoclonal antibodies against this protein.