Date : 2010
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Mycobacterium -- Dissertations universitaires comme sujet
Recombinaison génétique -- Dissertations universitaires comme sujet
Glycolipides -- Dissertations universitaires comme sujet
Glycopeptides -- Dissertations universitaires comme sujet
Infections à mycobactéries non tuberculeuses -- Dissertations universitaires comme sujet
Analyse de séquence d'ADN -- Dissertations universitaires comme sujet
Virulence -- Dissertations universitaires comme sujet
Collection : Lille-thèses / Atelier de reproduction des thèses / Lille : Atelier national de reproduction des thèses , 1983-2017
Résumé / Abstract : Mycobacîerium abscessus est un pathogène émergent responsable d'infections respiratoires sévères chez les patients atteints de la mucoviscidose. Cette espèce est également responsable d'infections extra-pulmonaires, notamment en cas de transplantation, et se caractérise par une faible susceptibilité aux antibiotiques. Le génome de cette mycobactérie a été séquence et des puces à ADN ont été développées. Des études effectuées sur des variants naturels lisses et rugueux montrent que les isolats rugueux sont hypervirulents. Ces isolats ne produisent pas de glycopeptidolipides (GPL), un métabolite lipidique de surface. On peut donc se demander si l'absence de ce lipide est responsable de cette hypervirulence. La première partie de ma thèse a été de développer des outils génétiques adaptés à M. abscessus. En utilisant le système dit de « recombineering », nous avons construit une souche mutante caractérisée par sa faible production des GPL (AmmpL4b). Afin de prouver le rôle de ce gène dans un phénotype donné, nous avons aussi adapté un système de complémentation à M. abscessus en testant des plasmides réplicatifs et intégratifs ayant démontré leur efficacité chez d'autres espèces. Dans ce travail, nous avons montré que la production des GPL engendre des modifications de surface de la cellule comme la mobilité par glissement. La virulence des souches (sauvage, mutante et complémentée) a été évaluée in vitro dans des modèles cellulaires et in vivo dans des modèles murins. Ces tests de virulence montrent que ce n'est pas que l'absence des GPL qui est impliquée dans la virulence de M abscessus. Nous privilégions à l'heure actuelle l'hypothèse qu'un autre facteur intervient directement ou indirectement dans cette virulence. Dans le futur, la caractérisation de la virulence de cet organisme ouvra la voie au développement de nouvelles drogues ou vaccins contre ce pathogène émergent
Résumé / Abstract : Mycobacterium abscessus is a rapidly growing mycobacterial species that can be involved in pulmonary and disseminated infections in immunosuppressed or young cystic fibrosis patients. It is an emerging pathogen and has attracted recent attention due to the numerous cases of infection; furthermore, genomic tools have been developed for this species. Nevertheless, the study of this species has until now been limited to spontaneous variants. We have compared three different mutagenesis Systems : the ts-sacB, the phage, and the recombineering Systems, and show that there are important differences in their efficiency for the construction of allelic-exchange mutants. We show, using the mmpL4b gene of the glycopeptidolipid pathway as a target, that allelic-exchange mutants can be constructed with a reasonable efficiency ( 7%) using the recombineering System. Studies on this species were limited so far to natural spontaneous variants. These studies have nevertheless showed that the Rough variants of M abscessus which are characterized by a low production of glycopeptidolipids are hypervirulent in human and also in in vivo models. Interestingly, these highly virulent isolates strongly induce TNF-α secretion by macrophages. However, the mechanism of the higher virulence process is currently unknown. The mutant constructed in this study, which is low glycopeptidolipids producer, is unable to slide and it loss the ability to form biofilms. These confirm the role of glycopeptidolipids in the modification of cell surface. Using in vivo model the virulence of this mutant has been tested. This study shows that other factor is involved with the lack glycopeptidolipids in the virulence of M abscessus. The study of the mechanism of the virulence of M abscessus is a pre-requisite to develop new drugs or vaccine candidates against this emerging pathogen