Date : 2019
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Leucémie aigüe lymphoblastique -- Génétique
ADN -- Méthylation
5-Méthyl-cytosine -- Dissertation universitaire
Classification Dewey : 615.1
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Résumé / Abstract : L'identification des anomalies génétiques dans les leucémies aigües myéloblastiques (LAM) est aujourd'hui indispensable pour caractériser la pathologie. Ces mutations apparaissent souvent dans les gènes impliqués dans la régulation de la méthylation de l'ADN notamment DNMT3A, TET2 et IDH. Les objectifs de ces travaux ont été d'une part, d'étudier les taux de 5-méthylcytosine (5mC) et de 5-hydroxyméthylcytosine (5hmC) dans les LAM, d'autre part d'évaluer les liens entre la méthylation de l'ADN et le fer. Nous avons mesuré les taux de 5mC et 5hmC, dans un premier temps dans des échantillons médullaires de 25 patients atteints de LAM et, dans un second temps dans les lignées leucémiques KG1, HL60, K562, OCI-AML3 et HEL privées en fer par chélation par la déféroxamine, puis re-supplémentées par la transferrine. Les mesures de 5mC et 5hmC ont été réalisées par spectrométrie de masse en tandem avec utilisation de standards internes isotopiques. Nous montrons que les taux de 5hmC sont différents selon le type de LAM sans variation apparente des taux de 5mC. Les taux de 5hmC sont plus faible lors de mutation DNMT3A, IDH1/2 ou lors de l'absence d'anomalie cytogénétique et semble plus faibles lors de mutation de TET2. Lorsque le pronostic des patients est défavorable, les taux de 5hmC semblent augmentés. Quant aux lignées, les taux de 5mC et 5hmC à l'état basal sont différents selon la lignée étudiée et lors d'une privation en fer, les taux de 5mC augmentent sans variation des taux de 5hmC. L'étude et la caractérisation des signatures épigénétiques des LAM pourraient, à terme permettre l'utilisation de ces biomarqueurs en pratique clinique pour la prise en charge des LAM.
Résumé / Abstract : The identification of genetic abnormalities in acute myeloid leukemia (AML) is now essential to characterize the pathology. These mutations often appear in the regulation genes involved in DNA methylation, in particular DNMT3A, TET2, IDH1 or 2. The objectives of this work were, on the one hand, to study the levels of 5-methylcytosine (5mC) and 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC) in AML, on the other hand to evaluate the links between methylation of DNA and iron. We measured the levels of 5mC and 5hmC, initially in medullary samples of 25 patients with AML and, secondly, in leukemic lines KG1, HL60, K562, OCI-AML3 and HEL deprived of iron by chelation with the deferoxamine and then re-supplemented with transferrin. The measurements of 5mC and 5hmC were carried out by tandem mass spectrometry using an isotopic internal standard. We show that the levels of 5hmC are different according to the type of AML without apparent variation of the 5mC levels. The 5hmC levels are lower during DNMT3A, IDH 1/2 mutation, or when there is no cytogenetic abnormality and seem weaker during mutation of TET2. When the prognosis of the patients are unfavorable, the rates of 5hmC seem increased. As for the cell lines, the rates of 5mC and 5hmC in the basal state are different according to the studied line and during an iron deprivation, the rates of 5mC increase without variation of the rates of 5hmC. The study and the characterization of the epigenetic signatures of the AML could eventually allow the use of these biomarkers in clinical practice for the personalized management of AML.