Date : 2007
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Collection : Lille-thèses / Atelier de reproduction des thèses / Lille : Atelier national de reproduction des thèses , 1983-2017
Résumé / Abstract : Nous avons établi plusieurs lignées de souris transgéniques dans lesquelles la surexpression de gènes MYC dans le foie, sous contrôle des éléments régulateurs du virus de l'hépatite B de la marmotte, induit l'apparition de cancers du foie. La réactivation de la voie Wnt est un des mécanismes principaux impliqué dans la tumorigenèse hépatique. Les carcinomes hépatocellulaires humains et murins présentent un taux significatif d'altération de la beta-caténine. Afin d'explorer les nouvelles cibles activées par la voie Wnt/beta-caténine dans ces tumeurs, nous avons comparé le profil d'expression des tumeurs et avons identifié le gène TBX3 comme spécifiquement activé dans les tumeurs comportant une mutation de la beta-caténine. Par des études d'immunoprécipitation de la chromatine et de stimulation du promoteur, nous avons montré que TBX3 était une cible transcriptionnelle directe du complexe beta-caténine/Tcf. Nous avons également démontré que l'inhibition de l'expression du TBX3 endogène par ARN interférence, réduisait de façon importante la croissance dépendante de l'ancrage et abolissait la protection médiée par la beta-caténine à rencontre de l'apoptose. Par ailleurs, nous avons recherché de nouveaux partenaires de la beta-caténine par un crible double hybride chez la levure. Nous avons identifié FHL2 comme coactivateur de la beta-caténine. et montré que CBP/p300 coactivateurs connus de la beta-caténine sont des partenaires directs de FHL2. Enfin, nous avons étudié l'impact de l'absence de FHL2 dans la prolifération, l'immortalisation et la transformation grâce à l'étude des fibroblaste embryonnaires issus de souris invalidés dans le gène codant FHL2
Résumé / Abstract : Transgenic mice carrying a MYC oncogene controlled by woodchuck hepatitis virus (WHV) regulatory sequences were highly predisposed to liver cancer. Activating mutations of P-catenin were found at significant rates in these HCCs, as for humain HCCs. To explore downstream genetic programs activated by Wnt/Beta-catenin signaling in liver cancer, we employed microarray profiling and found that T-box protein 3 (TBX3) was specially acitivated in murine tumors carrying miutant p-catenin. We cloned the TBX3 promoter and used a combination of chromatin immunoprecipitation (ChIP) and reporter assay that led to identified TBX3 as a direct transcriptional target of the Beta-catenin/Tcf complex. We also showed that Tbx3 plays a crucial role in cell proliferation and survival. Inhibition of TBX3 expression by RNA interference dramatically reduced anchorage-independent growth and abolished P-catenin protection over doxorubicin-induced apoptosis in tumor cells. To get insight P-catenin activity regulation, we carried out yeast two-hybrid screen to find novel partners of Beta -catenin and identified four and a half LIM only protein 2 (FHL2). We demonstrated that FHL2 coactivates p-catenin and could interact directly with CBP/p300 which are known as Beta-catenin activators. Using mouse embryonic fibroblasts derived from FHL2 null mice, we have studied proliferation, immortalization and transformation in absence of FHL2