Apport à la production d'hépatocytes à usage pharmacotoxicologique et thérapeutique : étude de la différenciation des cellules souches embyonnaires humaines en endoderme hépatique induit par une lignée stromale / Yves-Edouard Herpe ; sous la direction de Yacine Laâbi

Résumé / Abstract : Nous présentons principalement ici une stratégie de différenciation des cellules souches embryonnaires humaines (hESC) en endoderme hépatique basée sur l'utilisation d'une lignée stromale. Quand les hES sont cultivées en présence de la lignée stromale ou de son milieu conditionné, les hESC donnent naissance à des structures tridimensionnelles typiques. L'étude par microscopie électronique montre que les cellules forment, en cours de différenciation, un épithélium présentant des caractéristiques hépatiques (granules de glycogène, structures canaliculaires). L'étude par RT-PCR et immunocytochimie démontre que, au cours du processus de différenciation, la modification du profil phénotypique des cellules mime de façon frappante les différentes phases du développement de l'endoderme hépatique in vivo, avec l'apparition en fin de processus d'une population cellulaire arborant un profil phénotypique d'hépatoblaste.

Résumé / Abstract : Here we mainly describe a strategy based on the use of a stroma!cell line (SCL) to obtain hepatic endodermal cells from human embryonic stem cells (hESC). When co-cultured with the SCL or its conditioned medium, hESC cells give rise to typical three dimensional structures. Electron microscopy analysis of the cells undergoing differentiation shows the formation of a typical hepatic epithelium (glycogen granules, canaliculi-like structures). lmmunofluorescence and RT-PCR transcriptional studies demonstrated that during the course of the differentiation process, hESC cells progressively modify their gene expression profile strickingly mimicking hepatic endodermal development in vivo. Finally, a population of cells displaying membrane markers of hepatoblasts appears at the end of the differentiation process.