Date : 2009
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Résumé / Abstract : Le gène TMEM16A a été isolé à l’issu d’un crible à l’aide de « Differential Display » et « microarrays » visant à identifier des gènes dont l’expression est altérée dans des cellules cancéreuses des VADS. TMEM16A est fortement exprimé dans les cancers des VADS et dans plusieurs autres types de cancers. De plus, la protéine est localisée préférentiellement à la surface des cellules situées au niveau des fronts d’invasion. TMEM16A se situe dans le locus CCND1-EMS1 de la région génomique 11q13 souvent amplifiée dans les cancers humains. L’analyse bioinformatique montre que TMEM16A possède plusieurs transcrits codant pour les protéines à 8, 7, 5 ou 4 domaines transmembranaires (TM). Étant donné que les rôles fonctionnels de TMEM16Adeumeurent peu connus à ce jour, nous nous sommes alors interrogés sur l’implication de TMEM16A lors de la tumorigenèse et par conséquent sur la possibilité que ce gène puisse constituer une nouvelle cible thérapeutique dans des traitements anti-cancéreux ? L e transcrit BC033036/ORAOV2 du gène TMEM16A code pour une isoforme à 8 domaines TM et est surexprimé dans les cellules cancéreuses. La surexpression du variant 8TM/ORAOV2 dans la ligné épithéliale Hep-2, issue d’une tumeur des VADS, n’a pas affecté la prolifération et la croissance en agar mou mais a stimulé la migration et l’invasion. L’effet de TMEM16A sur la migration est illustré par une adhérence et un étalement cellulaires rapides mais surtout par une faible force d’adhérence des cellules sur le fond de la boîte de Pétri. L’inhibition de TMEM16A dans un clone surexprimant la forme 8TM diminue la vitesse de fermeture et de la strie et permet de restaurer le comportement initial, comparable à celui du clone témoin. TMEM16A est exprimé de manière endogène dans les cellules de la lignée SCC-25, issue d’une tumeur des VADS. L’inhibition de la forme endogène de TMEM16A dans SCC-25 provoque une baisse significative de la vitesse de migration cellulaire. Cette observation valide la pertinence de TMEM16A en tant que cible thérapeutique anticancéreuse. Elle devra être complétée par des tests in vitro et in vivo. En particulier, il sera intéressant de générer des anticorps neutralisants de TMEM16A qui pourraient servir de médicament contre le cancer.
Résumé / Abstract : The TMEM16A gene was isolated by different display in our laboratory as a highly overexpressed transcript in head and neck tumours. This gene is located at the CCND1-EMS1 locus of human chromosome 11q13 that is amplified in cancer. We are interested in the study of the function of the TMEM16A gene. Bioinformatics’ research shows that this gene produces: 3 isoforms that code for 8 transmembrane domains proteins (8TM), 1 for a 5 transmembrane domains protein (5TM), 1 for a 7 transmembrane domains protein (7TM) and one for a 4TM. After the generation and testing of a serie of antibodies, we were able to show a higher protein expression of TMEM16A in tumour samples by immunohistochemistry. We also confirmed TMEM16A overexpression in tumors by TR-qPCR and Northern blot. We cloned cDNAs that code for the 7TM and 8TM forms. We then studies the effects of 8TM overexpression of TMEM16A deficient cell-line Hep-2, on cell cycle, proliferation and tumorigenicity. The overexpression of TMEM16A stimulated migration and invasion. Changes in cell adhesion and spreading were also noticed. Silencing TMEM16A in 8TM overexpressing clone (HEp-2 cell-line) decreases cell migration and leads to the restoration of the initial state (control clone). Silencing TMEM16A in SCC-25 carcinoma cells which have high endogenous level of TMEM16A also causes a significant decrease of cell migration. This gene, because of its expression on the cell surface, could be a promising target for cancer therapy.