Date : 2012
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 2012
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : anglais / English
Détecteurs de produits chimiques
Résumé / Abstract : L’objectif de cette thèse était de développer de nouvelles méthodes bio-analytiques pour la détection de deux biotoxines: l’acide okadaique (OA) et l’ochratoxine A (OTA). La première partie était basée sur le développement d’un essai colorimétrique pour la détection de l’OA par l’utilisation de l’enzyme Protéine Phosphatase 2A (PP2A) comme élément de reconnaissance, immobilisée dans trois types de matrices : le sol gel, le gel d’agarose et un gel photopolymerisable. Ces trois méthodes d’immobilisation ont été optimisées et comparées pour détecter l’OA. La deuxième partie était basée sur le développement d’immuno-essais colorimétrique et électrochimique pour la détection de l’OA. Les immuno-essais de format compétitif indirecte avec marquage (alcaline phosphatase), basés sur l’immobilisation de l’OA par les billes magnétiques (MBs) et les sels de diazonium ont été développés en batch et en flux. Pour éviter la complexité associée au système avec marquage, une détection sans marquage basée sur l’immobilisation d’anticorps par adsorption physique, protéine-G-MBs et modification covalente a été réalisée. La troisième partie de mes travaux consistait au développement d’aptacapteurs pour la détection de l’OTA, en utilisant soit des billes magnétiques ou la méthode de « click-chemistry » pour l’immobilisation et un mode de détection électrochimique avec ou sans marquage.
Résumé / Abstract : This work was focused on the development of new bioanalytical methods, exploring different bioreceptors, immobilization techniques and transduction methods, for the detection of okadaic acid (OA) and ochratoxin A (OTA) in food samples. The first part was based on the development of colorimetric assays by exploiting the inhibitory effect of the OA on protein phosphatase 2A (PP2A). PP2A purchased from GTP Technology, ZEU Immunotec and Millipore was entrapped within several membranes: photopolymers, sol-gel and agarose gels. These different immobilization techniques were tested, optimized and compared to detect OA. The second part was focused on the development of colorimetric and electrochemical immunoassays for OA detection. Enzyme-linked indirect competitive immunoassays based on OA immobilization via MBs and diazonium chemistry were developed both in batch and automated flow mode. To avoid the complexity involved in labeling of biomolecules, label-free detection techniques based on antibody immobilization via physical adsorption, protein-G-Mbs and covalent attachment were also investigated to detect OA. In the third part, the development of aptasensors for the detection of OTA was carried out. The aptasensor were based on MBs and click chemistry to perform the labeled and non-labeled electrochemical detection.