Date : 2012
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 2012
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : anglais / English
Spermatogenèse -- Chez les animaux
Danio rerio -- Reproduction (biologie)
Tissus (histologie) -- Cultures cellulaires
Résumé / Abstract : Spermatogenesis is tightly regulated by numerous gonadal paracrine factors that have to be spatially and temporally coordinated. The gsdf gene encodes for a member of the TGF-β family that is specifically and differentially expressed in the somatic Sertoli cells during spermatogenesis in teleosts. The present study was aimed to study the hormonal regulation and function of the gsdf gene in zebrafish. We showed that gsdf is negatively regulated by androgens in vivo in female and male after exposure to 50 and 250 nM Methyltestosterone for 4 days. To study the function of the gsdf gene in vivo, we produced transgenic zebrafish lines to trigger an ectopic expression of a bicistronic transcript encoding for the Gsdf and Gfp proteins in the gonads. Two candidate promoters (hCMV-IE and sycp1) were tested. The first promoter hCMV-IE did not express the transgene in the testis. The sycp1 promoter was capable to trigger significant levels of transgene expression but expression of the bicistronic transcript remained negligible compared to the endogenous gsdf gene expression. No obvious phenotype was observed in transgenic animals. Using an in vitro zebrafish testicular tissue culture system, we demonstrated that a zebrafish recombinant Gsdf protein produced in HEK293E cells stimulated the proliferation of type A undifferentiated spermatogonia. Altogether our data suggest that Gsdf is negatively regulated by androgens and stimulates the spermatogonial proliferations.
Résumé / Abstract : La spermatogenèse est étroitement contrôlée par de nombreux facteurs paracrines dont les actions doivent être coordonnées dans l'espace et le temps. Le gène gsdf est un membre de la famille TGF-β différenciellement exprimés dans les cellules somatiques de Sertoli au cours de la spermatogenèse chez les poissons téléostéens. L'étude présentée a eu pour objectifs d'étudier la régulation hormonale et la fonction de ce gène chez le zebrafish. Nous mettons en évidence que le gène est négativement régulé in vivo par les androgènes après une exposition des animaux à la méthyltestostérone. Pour étudier la fonction du gène gsdf in vivo, nous avons produit des lignées transgéniques indépendantes destinées à surexprimer ectopiquement un messager codant pour Gsdf et la GFP dans les gonades. Deux promoteurs candidats ont été utilisés pour la production des lignées transgéniques. Le premier promoteur hCMV-IE choisi n'exprime pas de transgène dans le testicule. Par contre, les lignées portant le promoteur sycp1 révèlent une expression significative du transgène dans les gonades mais celle-ci reste cependant négligeable par rapport à celle du gène endogène. Aucune perturbation claire de la gamétogenèse et de la fertilité n'a été observée chez les animaux transgéniques. Une autre approche fonctionnelle complémentaire a été entreprise in vitro. Nous démontrons qu'une protéine recombinante Gsdf stimule la prolifération des spermatogonies A indifférenciées de zebrafish dans un système de culture d'explants testiculaires. Pris ensemble, nos données suggèrent que Gsdf est négativement régulé par les androgènes et que cette protéine a un effet stimulateur des proliférations goniales.