Date : 2008
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 2008
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Lymphocytes -- Dissertation universitaire
Antigènes CD4 -- Dissertation universitaire
Produits du gène nef du virus de l'immunodéficience humaine -- Dissertation universitaire
VIH-1 (Virus de l'Immunodéficience Humaine de type 1) -- Dissertation universitaire
Monocytes -- Dissertation universitaire
Résumé / Abstract : Les multiples propriétés de la protéine Nef du VIH-1 sont responsables de sa capacité à accélérer la progression vers l'immunodéficience in vivo. Dans ce travail de thèse, nous avons choisi d'explorer les mécanismes qui régissent deux des fonctions les plus conservées dans les isolats primaires de nef: (i) la diminution de l'expression de surface de CD4 dans les cellules cibles du VIH et (ii) l'augmentation du pouvoir infectieux des particules virales néoformées. C'est en interférant avec les éléments de la machinerie de l'endocytose que Nef provoque la diminution de l'expression de surface de CD4, à la fois dans les lignées lymphoïdes et myéloïdes. Cependant, le trafic intracellulaire de CD4 est régit par des règles différentes dans ces cellules: dans les cellules myéloïdes, CD4 est rapidement internalisé, alors que dans les cellules lymphoïdes, CD4 est stabilisé à la surface, notamment grâce à son interaction avec la tyrosine kinase p56lck. Dans cette étude, nous montrons que Nef augmente le taux d'internalisation de CD4 uniquement dans les cellules qui expriment p56lck. Nef utilise donc des mécanismes distincts pour réduire l'expression de surface de CD4 dans les cellules lymphoïdes et myéloïdes. A ce jour il n'y a pas de consensus quant aux contributions respectives des fonctions remplies par Nef pendant la biogénèse virale ou lorsque le virus atteint les cellules cibles, à l'augmentation du pouvoir infectieux. Des protéines de fusion de Nef ont été construites, nous permettant de manipuler les quantités de Nef incorporées dans les particules virales. Cette étude nous a permis d'établir que l'incorporation de Nef dans les particules virales n'est pas suffisante pour induire une augmentation du pouvoir infectieux des particules virales ; le corolaire en est que Nef exerce probablement des fonctions pendant la biogénèse virale, qui sont déterminantes pour les propriétés infectieuses des particules virales.
Résumé / Abstract : HIV-1 Nef accelerates progression towards immunodeficiency in vivo. During my thesis we explored two of the most conserved functions of Nef: (i) CD4 downregulation in HIV-1 target cells and (ii) viral infectivity enhancement. Interference of Nef with the endocytic machinery causes CD4 cell surface downregulation. However, CD4 trafficking is governed by different rules in the target cells of the infection: in myeloid cells CD4 is rapidly internalized from the cell surface whilst in lymphoid cells, CD4 is stabilized at the cell surface through interaction with the tyrosine kinase p56lck. In this study, we show that Nef increases CD4 internalization rate only in cells that express p56lck. Therefore Nef uses different mechanisms to downregulate CD4 from the cell surface of myeloid and lymphoid cells. To date, the relative contribution of the functions of Nef during viral biogenesis and upon arrival in the target cells to the Nef dependent increase of viral infectivity, have not been deciphered yet. We designed fusion proteins that allowed the manipulation of the amount of Nef in producer cells and incorporated into viral particles. This study allowed us to determine that the incorporation of Nef into viral particles is not sufficient to cause an increase of viral infectivity. Nef must therefore exert functions, during viral biogenesis, that are crucial for the infectivity of nascent viral particles.