Date : 2007
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 2007
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Résumé / Abstract : Les adénovirus (Ad) sont des agents de transfert de gène efficaces. Ils sont des vecteurs de choix pour l’étude de la mucoviscidose (MV). La MV est une maladie génétique, due à des mutations dans le gène CFTR, qui se caractérise par une atteinte respiratoire sévère. Nous avons étudié l’expression de la protéine CFTR fusionnée à la GFP apportée par un vecteur adénoviral dans des lignées cellulaires trachéales glandulaires et des cultures primaires pulmonaires. Notre construction GFP-CFTR s’est montrée parfaitement fonctionnelle et le signal GFP permet le suivi du produit du transgène dans la cellule. A haute dose virale, un effet négatif sur l’activité CFTR a été observé et associé à la voie d’entrée du virus dépendante de la base de penton. Un nouveau vecteur chimérique portant une fibre de sérotype 35 dépourvu de toxicité et exprimant la construction GFP-CFTR a été construit pour une application thérapeutique. Outre la MV, les vecteurs Ad ont été ciblés sur des lignées de cellules tumorales. Par insertion de molécules appelées Affibody™ fixant le domaine Fc des anticorps dans la fibre, les vecteurs ont pu être reciblés vers des marqueurs cellulaires de cancer du sein et ovarien
Résumé / Abstract : Adenoviruses (Ad) are efficient gene transfer vectors. In this study, Ad vectors were developed for cystic fibrosis (CF), a genetic disease characterized by pulmonary complications due to mutations in the CFTR gene. The aim of this work was to construct an Ad5/GFP-CFTR vector which would allow the tracking of both the cellular localization and chloride channel function of the CFTR protein in Ad-transduced cells. The gene delivery of GFP-CFTR by Ad to CFTR-deficient human airway epithelial and tracheal cells showed correction of chloride channel CFTR activity and apical localization of GFP-CFTR. However, the Ad5 vector showed inhibition of CFTR activity at high vector doses which was associated to the penton base-integrin entry pathway. A chimeric Ad5/Fi35 vector was developed which had no toxic effect on the CFTR activity and efficiently transduced lung cells. This work also concerned the re-targeting of Ad vectors to different cell types of interest. Novel Ad vectors with fibers carrying AffibodyTM molecules which bind the Fc domain of antibodies were developed to allow re-targeting of Ad to specific cell receptors using antibodies