Date : 2006
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 2006
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Résumé / Abstract : Le transfert d'un gène de globine dans les cellules souches hématopoïétiques autologues devrait bénéficier aux patients souffrant de b-thalassémie ou d drépanocytose, les maladies génétiques les plus répandues chez l'homme. La preuve de l'efficacité de ce traitement a été obtenue dans différents modèles murins d'hémoglobinopathies grâce à des vecteurs lentiviraux exprimant la b-globine humaine (vecteur LentiGlobin). Sur la voie d'un essai clinique, trois problèmes importants ont été étudiés. 1) La sécurité oncogénique du vecteur LentiGlobin auto-inactivant et pourvu d'insulateurs a été évaluée chez des souris létalement irradiées après greffe de cellules médullaires génétiquement modifiées par le vecteur. Les analyses biologiques et toxicologiques n'ont montré aucun effet oncogénique associé à la présence du vecteur. 2) La méyloablation est un obstacle majeur au traitement par thérapie génique, à grande échelle, des maladies héréditaires du système hématopoïétique. Effectivement, en absence de conditionnement myéloablatif ou d'avantage sélectif des cellules génétiquement modifiées, aucun bénéfice thérapeutique n'est observé. Deux systèmes dont l'objectif est d'amplifier spécifiquement les cellules érythroïdes génétiquement modifiées ont été testés. Le premier est basé sur une érythropoïétine ancrée à la surface cellulain et le deuxième utilise un récepteur tronqué de l'érythropoietine. Ce dernier conduit à l'amplification spécifique des cellules érythroïdes in vivo, sans prolifération cellulaire incontrôlée. 3) Une méthode permettant d'identifier et de quantifier la protéine thérapeutique a été développée pour corréler sa production à l'amélioration phénotypique.
Résumé / Abstract : The transfer of a regulated b-globin gene in autologous haematopoietic stem cells should benefit to patients with b-thalassemia and sickle cell disease, the most common monogenic disorders in humans. Proof-of-principle for the efficacy of this treatment has been obtained in various mouse models of haemoglobinopathies using lentiviral vectors expressing thé human b-globin (lentiglobin). In this work, three main issues were studied on the way leading to the LentiGlobin clinical trial. 1) The oncogenic safety of a self-inactivating, insulator containing, LentiGlobin vector was assessed by transplanting LentiGlobin modified mouse bone marrow cells in lethally irradiated recipients. Biological and toxicological studies did not show any evidence of oncogenesis associated to the vector. 2) A major drawback to the large use of haematopoietic gene therapy for inherited disorders is the toxicity of myeloablation and the absence of therapeutic effect without this kind of conditioning (in absence of spontaneous selective advantage). Two Systems were designed in order to amplify specifically the genetically modified erythroid cells and to reduce the toxic myeloablative conditioning. One is based on a cell surface anchored erythropoietin and the other on a truncated erythropoietin receptor. Modified erythropoietin receptor led to specific erythroid amplification in vivo with no sign of uncontrolled cell proliferation. 3) Therapeutic haemoglobin identification and quantification is of major concern in order to establish a correlation between transgene expression and phenotypic improvement. A new method of high performance liquid chromatography was successfully design with this purpose.