Date : 2006
Editeur / Publisher : [s.l.] : [s.n.] , 2006
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Résumé / Abstract : Bien que la molécule d’adhésion MCAM/CD146 (Melanoma Cell Adhesion Molecule) soit un marqueur des progéniteurs hématopoïétiques, des lymphocytes T activés et des endothéliums, sa fonction au niveau des ces tissus n’est pas encore élucidée. MCAM/CD146 est une glycoprotéine du sous-groupe V-V-C2-C2-C2 de la superfamille des Immunoglobulines. Elle existe sous deux isoformes différentes suivant la taille de la région cytoplasmique : MCAM-l (long) et MCAM-s (court). Le but de cette étude était de déterminer la fonction de la molécule MCAM dans les différentes étapes du recrutement leucocytaire par l’endothélium in vitro. Nous avons utilisé d’une part, une lignée de lymphocytes activés CD4+MCAM-l+ (CETM4) et d’autre part, la lignée Natural Killer (NKL1) exprimant les différentes isoformes de la molécule MCAM. Dans un système de flux continu in vitro, l’expression de l’isoforme MCAM-l, diminue la vitesse du roulement et augmente l’adhésion de NKL1 et CEMT4 sur la monocouche de cellules endothéliales. L’utilisation d’anticorps spécifiques et de protéines MCAM solubles lors de ces expériences confirme l’implication de l’isoforme MCAM-l dans ces processus. Par ailleurs, l’expression de MCAM-l dans les NKL1 induit l’augmentation du nombre et de la taille des microvillosités et favorise les interactions moléculaires lors du « rolling ». Enfin, les cellules MDCK ont permis d’établir un adressage différentiel des isoformes de MCAM dans un épithélium polarisé : MCAM-l est localisé au pôle baso-latéral alors que MCAM-s est détectée par défaut au pôle apical suggérant des rôles différents. L’ensemble de ces résultats permet l’établissement d’un modèle présentant les rôles potentiels de cette molécule dans l’interaction leucocyte-endothélium.
Résumé / Abstract : Although the adhesion molecule MCAM/CD146 (Melanoma Cell Molecule Adhesion) was identified as a marker of hematopoietic progenitors, activated lymphocytes T and endotheliums, its function on these tissues is not yet elucidated. MCAM/CD146 belongs to the Ig superfamily (V-V-C2-C2-C2) and is expressed as two isoforms differing by their cytoplasmic regions (MCAM-l, long, and MCAM-s, short). The objective of this research is to demonstrate the involvement of MCAM/CD146 in the differents steps of leukocyte recruitment by endothelium in vitro. We used for that two human cell line : activated CD4 T cells expressing endogenous MCAM-l and Human NKL1 natural killer cells were transfected by MCAM-l and MCAM-s and submitted to adhesion on endothelial cell monolayer under shear stress. We shown that MCAM-l transfection reduced rolling velocity and increased NKL1 cell adhesion whereas MCAM-s or mock transfection had no effect. Antibody treatment and MCAM recombinant protein allowed to confirm the implication of MCAM-l in these biologic process. In addition, MCAM-l induced microvilli formation and was associated to the actin cytoskeleton in NKL1 cells. Differents mutations of MCAM-l shown that these structures require a serine residue phosphorylation by PKC pathway. Finally, establishing of polarized MDCK cells revealed that MCAM-s was addressed to apical side and MCAM-l to baso-lateral membranes suggesting different roles. Taken together these data show for the first time that MCAM is involved in the control of the initial steps of lymphocyte homing and suggest different role for MCAM-l and MCAM-s isoforms.