Date : 2005
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 2005
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Protéines d'activation de la ras GTPase -- Dissertation universitaire
Domaine d'homologie SRC -- Dissertation universitaire
Techniques de double hybride -- Dissertation universitaire
Aptamères peptidiques -- Dissertation universitaire
Résumé / Abstract : Au sein de la voie Ras, fréquemment impliquée dans les tumeurs humaines, la protéine RasGAP joue un rôle particulier, à la fois régulateur négatif et effecteur de Ras. RasGAP-SH3 a déjà été identifiée comme une cible thérapeutique pertinente par plusieurs équipes. Par un crible double-hybride, nous avons obtenu des protéines synthétiques (aptamères), interagissant spécifiquement avec le domaine SH3 de RasGAP, et exprimés dans des cellules tumorales provoque une diminution de leur capacité à former des colonies et de leur viabilité cellulaire. Nous avons synthétisé les peptides responsables de leur interaction avec RasGAP-SH3, et mesuré leur affinité. Nous avons ainsi obtenu un peptide cyclique dont l'affinité est de l'ordre du micromolaire, et dont l'empreinte sur le SH3 a été déterminée par RMN. Ces données structurales permettront de modifier nos peptides, afin d'en augmenter affinité, et activité sur cellules en culture. L'activité anti-tumorale de ces molécules sera ensuite évaluée.
Résumé / Abstract : Within the Ras pathway, frequently implicated in human tumors, the RasGAP protein plays two apparently contrary roles, both as a negative regulator and a positive effector. Its SH3 domain has already been identified as a relevant anti-tumoral target. Using peptide aptamers obtained by yeast two-hybrid screening, we bring a new validation of this target: we have discovered synthetic proteins specifically interacting with RasGAP-SH3. Moreover, when expressed in tumor cells, they decrease their colony-forming capacity and their cell viability. We have synthesized peptides derived from their variable loops, responsible for the interaction with RasGAP-SH3, and evaluated their affinity. Our best molecule is a sub-micromolar-affinity cyclic peptide, which binding fingerprint on the SH3 has been determined by NMR. These structural data will guide modifications of our peptides, in order to increase their affinity and cell-penetrating capacity. Their antitumoral properties will then be assessed.