Date : 2002
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Classification Dewey : 615.1
Résumé / Abstract : L'ADN des cellules est la cible continuelle d'espèces réactives de l'oxygène tant endogènes (issues du métabolisme cellulaire aérobie) que formées lors de processus d'oxydation d'origine exogène (exposition à des radiations ionisantes ou divers produits chimiques, phénomènes de photosensibilisation médiée par les UV-A). Il en résulte une attaque oxydative sur l'ADN et la formation de divers dommages dits " oxydatifs " (bases oxydées ou dimérisation de bases adjacentes, formation de sites abasiques). L'analyse hospitalière souffre d'un manque considérable d'outils de détection et de suivi des dommages oxydatifs de l'ADN alors qu'elle propose ce même item comme index d'exposition à des substances mutagènes ou carcinogènes et éventuellement comme marqueur de pathologies oxydatives en dérivant (dont les cancers). Les méthodes traditionnelles d'études de systèmes de réparation enzymatique de l'ADN (premiers acteurs de la réparation cellulaire) et d'évaluation des constantes cinétiques des enzymes utilisent essentiellement le marquage radioactif de substrats cibles modifiés puis l'analyse des mélanges réactionnels après électrophorèse sur gel ou bien chromatographie liquide haute performance. Ces méthodes, bien que hautement résolutives, ont l'inconvénient de ne pas donner de résultats en temps réel (...). Ce travail relate la mise au point de deux techniques de détection et de suivi des dommages oxydatifs de l'ADN, l'une basée sur une étude à l'échelle de la cellule isolée (méthode Comète adaptée sur sang total) et l'autre reposant sur un principe physique de transfert d'énergie de fluorescence (FRET sur hairpin) à l'échelle moléculaire. Ces deux méthodes, complémentaires en terme de puissance d'analyse mettraient à disposition des résultats quant aux capacités intrinsèques de réparation de chaque patient, et permettraient de même une analyse quasi instantanée de plusieurs paramètres, reflet de la balance antioxydante de l'organisme. Leurs potentialités en analyse biomédicale laissent entrevoir des perspectives prometteuses en terme de réduction des temps d'analyse, amélioration de la fiabilité de la méthode donc des interprétations en découlant, avec l'objectif ultime d'une automatisation, couplée à une analyse parallèle de plusieurs échantillons. Bien que préliminaires, les résultats obtenus semblent encourageants et de plus amples investigations seront nécessaires afin d'en éprouver la robustesse.