Impact de la mutagénèse insertionnelle liée au virus de l'hépatite B dans la carcinogenèse hépatique : implication des protéines SERCA1 tronquées dans le processus d'apoptose / Mounia Chami ; sous la direction de Patrizia Paterlini-Bréchot

Résumé / Abstract : L'impact de la mutagenèse insertionnelle dans les mécanismes de carcinogenèse hépatique liée au virus de l'hépatite B (VHB) a été considéré pendant longtemps comme anécdotique. Nous avons appliqué la technique PCR-Alu afin d'analyser les sites d'intégration du génome viral dans le génome cellulaire et de définir l'impact réel de la mutagenèse insertionelle liée au VHB dans les mécanismes de carcinogenèse hépatique. Cette étude nous a permis d'isoler 21 jonctions ADN du VHB/ADN cellulaire à partir de 18 tumeurs. Dans cinq jonctions issues de cinq tumeurs différentes, l'ADN du VHB est intégré : 1) dans un nouveau gène de la famille TRAP (TRAP150 Thyroid Hormone Receptor Associated Protein 150), 2) dans un nouveau gène de la famille MCM (2/3/5) (Minichromosome Maintenance protein), 3) dans un nouveau gène non encore caractérisé, 4) dans le gène SERCA1 (Sarco Endoplasmic Reticulum Calcium ATP ase) et 5) en amont du promoteur du gène codant pour la telomerase hTERT (Human Telomerase Reverse Transcriptase). Nos résultats valorisent l'impact de la mutagenèse insertionnelle au cours de l'hépatocarcinogenèse et révèlent de nouveaux gènes potentiellement impliqués dans la tumorigenèse. Dans le cadre de l'analyse des sites d'intégration, le génome du VHB peut servir de sonde pour rechercher de nouveaux gènes et mécanismes impliqués dans la carcinogenèse hépatique. La suite de mon travail a été axée sur la caractérisation de l'intégration du VHB dans le gène SERCA1. Nous avons pu montrer la surexpression des ARN et des protéines hybrides dans la zone tumorale par rapport à la zone non tumorale. Les transcrits hybrides X VHB/SERCA1 sont constitués par une séquence X du VHB en 5' et une séquence SERCA1 en 3' caractérisée par un épissage alternatif de l'exon 4 et/ou de l'exon 11 donnant naissance à un codon stop prématuré au niveau de l'exon 12. Notre travail a pu également démontrer l'expression de ces deux nouveaux transcrits SERCA1 non chimériques dans différents tissus humains adultes et fœtaux. Ces transcrits codent pour des protéines SERCA1 tronquées en C terminale (S1T) incapables de fonctionner comme des pompes calciques. Les protéines hybrides et S1T montrent une localisation au niveau du RE et s'accumulent en homodimères dans la fraction microsomale des cellules. Leur expression in vitro induit une diminution de la concentration du calcium dans le RE associée à une augmentation de la fuite passive du calcium du RE vers le cytoplasme. L'expression des protéines hybrides et S1T induit également une apoptose dans trois lignées cellulaires d'origine hépatique. Cette deuxième partie de mon travail a permis de révéler un nouveau mécanisme de régulation de l'homéostasie calcique du RE et de suggérer son rôle dans le processus d'apoptose et de transformation cellulaire.