ETUDE STRUCTURALE DE LA BUTYRYLCHOLINESTERASE A L'AIDE DE MARQUEURS IRREVERSIBLES / FLORIAN NACHON ; SOUS LA DIRECTION DE MAURICE GOELDNER

Date :

Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 1999

Format : 200 P.

Type : Livre / Book

Type : Thèse / Thesis

Langue / Language : français / French

Goeldner, Maurice (Directeur de thèse / thesis advisor)

Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008) (Organisme de soutenance / degree-grantor)

Relation : ETUDE STRUCTURALE DE LA BUTYRYLCHOLINESTERASE A L'AIDE DE MARQUEURS IRREVERSIBLES / Florian Nachon ; sous la direction de Maurice Goeldner / Grenoble : Atelier national de reproduction des thèses , 1999

Résumé / Abstract : IL EXISTE DEUX TYPES DE CHOLINESTERASES CHEZ LES VERTEBRES : L'ACETYLCHOLINESTERASE (ACHE) ET LA BUTYRYLCHOLINESTERASE (BUCHE). CES DEUX ENZYMES HOMOLOGUES POSSEDENT UNE SPECIFICITE DIFFERENTE VIS-A-VIS DES SUBSTRATS ET INHIBITEURS. DES EXPERIENCES COMBINEES DE CRISTALLOGRAPHIE, DE MARQUAGE IRREVERSIBLE ET DE MUTAGENESE DIRIGEE ONT MONTRE QUE LES ACIDES AMINES TAPISSANT LA GORGE DU SITE ACTIF DES CHOLINESTERASES ETAIENT A L'ORIGINE DE LEUR DIFFERENCE DE SPECIFICITE. EN PARTICULIER, DEUX RESIDUS AROMATIQUES IMPORTANTS DU SITE ACTIF ET DU SITE PERIPHERIQUE DE L'ACHE DE TORPILLE (RESPECTIVEMENT PHE330 ET TRP279), SONT ABSENTS CHEZ LA BUCHE HUMAINE. COMME CES DEUX RESIDUS ONT ETE PHOTOMARQUES PAR LE DDF, NOUS AVONS UTILISE CETTE SONDE POUR CARACTERISER LES SITES DE LIAISON DES AMMONIUM QUATERNAIRES DE LA BUCHE HUMAINE. LA BUCHE PURIFIEE A ETE SPECIFIQUEMENT PHOTOMARQUEE PAR #3HDDF. LA PHOTOINCORPORATION DE LA SONDE EST PROTEGEABLE PAR LA TACRINE. APRES DEGLYCOSYLATION, LA BUCHE ALKYLEE A ETE TRYPSINOLYSEE ET LES BRUTS DE DIGESTION ONT ETE ANALYSES PAR LC/ES-MS ET MALDI-TOF-MS. UNE COMPARAISON DES FRAGMENTS TRYPTIQUES DE LA BUCHE MARQUEE ET NON MARQUEE A PERMIS D'IDENTIFIER LE PEPTIDE ALKYLE Y61-K103. LES PEPTIDES MARQUES ONT ETE PURIFIES PAR UNE CHROMATOGRAPHIE ECHANGEUSE DE CATIONS SUIVIE D'UNE CLHP SUR PHASE INVERSE. LEUR SEQUENCAGE A PERMIS D'IDENTIFIER LES RESIDUS ALKYLES TYR332 ET TRP82. LE PHOTOMARQUAGE DU TRP82 DEMONTRE QU'IL CONTRIBUE A LA LIAISON DES LIGANDS CATIONIQUES PAR INTERACTION CATION-, TOUT COMME LE RESIDU HOMOLOGUE DE L'ACHE DE TORPILLE (TRP84). LE PHOTOMARQUAGE DE TYR332 PROUVE L'EXISTENCE D'UNE DEUXIEME SITE DE LIAISON DES AMMONIUM QUATERNAIRES SUR LA BUCHE. EN ACCORD AVEC LE MODELE TRIDIMENSIONNEL DE LA BUCHE ET DES RESULTATS DE MUTAGENESE, NOUS PROPOSONS QUE TYR332 ET ASP70 DEFINISSENT UN SITE PERIPHERIQUE SUR LA BUCHE. NOUS CHERCHONS ACTUELLEMENT A ETUDIER LE ROLE DE CE SITE PERIPHERIQUE DANS LE FONCTIONNEMENT DE L'ENZYME.