Analyse génétique, physiologique et biochimique du système protéolytique de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus / par Christophe Gilbert,... ; sous la direction de R. Portalier

Date :

Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 1993

Type : Livre / Book

Type : Thèse / Thesis

Langue / Language : français / French

Langue / Language : anglais / English

Lactobacilles

Proline

Clonage moléculaire

Enzymes microbiennes

Biodégradation

Protéases

Portalier, Raymond (19..-.... ; microbiologiste) (Directeur de thèse / thesis advisor)

Université Claude Bernard (Lyon ; 1971-....) (Organisme de soutenance / degree-grantor)

Relation : Analyse génétique, physiologique et biochimique du système protéolytique de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus / par Christophe Gilbert,... ; sous la direction de R. Portalier / Grenoble : Atelier national de reproduction des thèses , 1993

Résumé / Abstract : LES BACTERIES LACTIQUES, GRAM POSITIVES, POSSEDENT UN SYSTEME PROTEOLYTIQUE COMPLEXE ET ESSENTIEL (PROTEINASES ET EXOPEPTIDASES) ASSURANT LA DEGRADATION DES CASEINES DU LAIT. QUATRE AMINOPEPTIDASES (API-IV), UNE X-PROLYL-DIPEPTIDYL-AMINOPEPTIDASE (X-PRO-DPAP) ET UNE PROTEINASE DE PAROI ETAIENT IDENTIFIEES CHEZ LA SOUCHE LACTOBACILLUS DELBRUECKII SUBSP. BULGARICUS CNRZ397. NOS TRAVAUX ONT CONSISTE A PURIFIER A PARTIR D'EXTRAITS DE PAROI CETTE CYSTEINE-PROTEINASE HYDROLYSANT RAPIDEMENT LES CASEINES. LE MONOMERE DE POIDS MOLECULAIRE 170000 EST ACTIF DANS LES CONDITIONS OPTIMALES SUIVANTES: TEMPERATURE, 42C ET PH 5,5. UN MUTANT DEFICIENT POUR CETTE ACTIVITE A ETE OBTENU. PAR AILLEURS, UNE PROLINE IMINOPEPTIDASE (PRO-IP) A ETE MISE EN EVIDENCE DANS LA PAROI DU LACTOBACILLE. LE GENE PIP CODANT POUR CETTE PRO-IP A ETE CLONE PUIS SEQUENCE (981 PAIRES DE BASES DONT LES 20 PREMIERS ACIDES AMINES CODES DU COTE NH2-TERMINAL FORMENT UNE REGION HYDROPHOBE SEMBLABLE AUX SEQUENCES SIGNALS DES PROTEINES EXPORTEES CHEZ LES LACTOCOQUES). L'EXPRESSION DU GENE PIP CHEZ E. COLI PERMET D'OBTENIR UNE ACTIVITE PRO-IP AMPLIFIEE 1000 FOIS, DONT 50% SONT RETROUVES DANS LE PERIPLASME, CE QUI A FACILITE LA PURIFICATION DE L'ENZYME. CETTE SERINE-PROTEASE ACTIVE SOUS LA FORME D'UN TRIMERE DE POIDS MOLECULAIRE 105000 (3 SOUS-UNITES DE 35000), AGIT EXCLUSIVEMENT SUR LES DI- ET TRIPEPTIDES DANS LESQUELS LA PROLINE EST EN POSITION AMINO-TERMINALE. L'ENZYME EST STABILISEE EN PRESENCE DE SERUMALBUMINE DE BUF A 30C ET A UN PH COMPRIS ENTRE 6,0 ET 7,0. LES 11 PREMIERS ACIDES AMINES DE LA SEQUENCE NH2-TERMINALE DE LA PRO-IP PURIFIEE CORRESPONDENT EXACTEMENT AUX RESIDUS 33 A 43 TRADUITS DU GENE PIP. LA PRESENCE D'UNE AUTRE ENZYME, DE TYPE AMINOPEPTIDASE P, LIBERANT UN ACIDE AMINE LIE AU COTE IMINE D'UNE PROLINE, A ETE MISE EN EVIDENCE. ENFIN, LE CLONAGE DE LA X-PRO-DPAP DU LACTOBACILLE CHEZ LACTOCOCCUS LACTIS S'ETANT HEURTE A DES PROBLEMES DE RECOMBINAISON ET DE REARRANGEMENT D'ADN, DE NOUVELLES SOUCHES HOTES DE LACTOCOCCUS LACTIS ONT ETE ISOLEES