Date : 1994
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Résumé / Abstract : Les travaux decrits dans ce rapport concernent l'etude de la structure du domaine tete de la fibre, le devenir et le role au cours des premieres minutes d'infection et la biogenese de la proteine fibre de l'adenovirus humain de serotype 2 (ad2). La fibre est une proteine de structure trimerique compacte terminee par une partie globulaire, la tete. La fonction de la fibre est de se lier au recepteur cellulaire. Pour realiser l'etude cristallographique du domaine tete de la fibre d'ad2, nous avons tout d'abord exprime cette proteine dans un systeme d'expression procaryotique. Par manque d'homogeneite dans le repliement de la population de proteine tete recombinante, il s'est avere impossible d'etablir un protocole de purification. Ce systeme fut abandonne au profit d'un systeme d'expression eucaryotique: le systeme de baculovirus. Apres purification du domaine tete recombinant, des analyses biochimiques (pontage chimique, proteolyse enzymatique), de la microscopie electronique et des etudes fonctionnelles (inhibition de liaison du virus sur les cellules hotes) nous ont permis de definir ce domaine comme une entite biologique presentant une structure trimetrique compacte et ayant comme fonction la reconnaissance des recepteurs cellulaires. Les cristaux du domaine tete obtenus ne furent pas d'une qualite suffisante pour determiner la structure tridimentionnelle de ce domaine. Lors de l'etude du role et du devenir de la fibre au cours de l'infection, et plus particulierement au cours de l'interaction de la fibre avec son recepteur, nous avons mis en evidence des changements structuraux s'operant au niveau des membranes des cellules associes a une sortie de calcium des cellules vers le milieu extra cellulaire dans les 5-10 premieres minutes d'infection. Les experiences preliminaires in vitro sur la proteine tete recombinante suggere que le calcium a un effet destabilisant de la structure de cette proteine. Parallelement a cette etude d'interaction, nous avons debute l'etude du processus de synthese, d'oligomerisation et de transport de la fibre dans des cellules hela infectees par de l'ad2 dans la phase tardive du cycle viral. Nous avons d'abord etabli un temps de synthese de la chaine polypeptidique (2 minutes), auquel nous avons associe un passage de la fibre vers le noyau: lieu d'assemblage du virus, immediat. Mais a ce jour beaucoup de questions restent en suspens