Date : 1997
Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 1997
Type : Livre / Book
Type : Thèse / ThesisLangue / Language : français / French
Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases
Résumé / Abstract : Depuis plusieurs années, il a été démontré que les nucléotides extracellulaires intervenaient dans la vasomotricité de la paroi artérielle. Il avait alors été suggéré sur la base d'expérimentations pharmacologiques que cette action des nucléotides extracellulaires était médiée par des récepteurs purinergiques P2 présents à la surface de la cellule musculaire lisse (CML) artérielle. Dans ce travail, nous nous sommes focalisés sur l'étude du récepteur purinergique P2y₂ car plusieurs données de la littérature suggèrent qu'il est impliqué non seulement dans la vasoconstriction mais aussi dans l'activation mitogène des CML induite par les nucléotides extracellulaires, l'ATP et l'UTP en particulier. Dans un premier temps, nous avons cherché à mettre en évidence les ARNm du récepteur P2y₂ dans la paroi artérielle. Pour ce faire, nous avons procédé au clonage d'un ADNc du récepteur P2y₂ de rat, ce qui nous a permis de mettre en évidence l'expression de son ARNm dans la CML maintenue dans son contexte tissulaire et dans la CML en culture. Nous avons utilisé cette sonde pour démontrer la présence des transcrits de ce récepteur dans les cellules humaines en culture, en particulier dans les CML artérielles et les cellules endothéliales, ainsi que dans les monocytes et les macrophages. Dans un deuxième temps, nous avons abordé l'étude des modulations de l'expression de ce récepteur grâce à la mise au point d'une technique d'hybridation in situ. Par cette approche, nous avons mis en évidence une grande variabilité d'expression de ce récepteur au cours du développement ontogénique et du vieillissement. En effet, dans l'aorte de l'embryon et du rat nouveau-né l’ARNm du P2y₂ est présent dans toutes les CML de la media, alors que chez l'adulte les cellules exprimant cet ARNm sont moins nombreuses et disséminées sans localisation préférentielle. Ces cellules acquièrent une répartition en périphérie de la media chez le rat âgé. Nous avons enfin démontré une forte expression du récepteur P2y₂ au niveau des CML des lésions intimales expérimentales de l'aorte de rat induites par le passage d'une sonde à ballonnet. Cette même approche nous a permis de démontrer l'expression des transcrits de ce récepteur a la fois dans les lésions athéroscléroses humaines et dans les lésions de resténose après angioplastie, non seulement au niveau des cml mais aussi dans les macrophages composants ces lésions, confirmant ainsi les observations réalisées en culture. Le travail que nous avons réalisé a permis de créer des outils pour améliorer la connaissance de l'expression de ce récepteur dans la CML et dans la paroi artérielle normale ou pathologique. Les études qui sont poursuivies sur ce récepteur et les autres récepteurs P2 devraient permettre de définir les fonctions spécifiques de ces récepteurs et le rôle des nucléotides extracellulaires dans la physiologie et la physiopathologie de la paroi artérielle.
Résumé / Abstract : It has been shown for several years that extracellular nucleotides are involved in the vasomotricity of the arterial wall. It was then suggested, on the basis of pharmacological experiments, that this action of extracellular nucleotides was mediated by P2 purinergic receptors present on the surface of the arterial smooth muscle cell (SMC). In this work, we focused on the study of the P2y₂ purinergic receptor because several data in the literature suggest that it is involved not only in vasoconstriction but also in the mitogenic activation of SMCs induced by extracellular nucleotides, ATP and UTP in particular. Initially, we sought to identify P2y₂ receptor mRNAs in the arterial wall. To do this, we cloned a rat P2y₂ receptor cDNA, which enabled us to demonstrate the expression of its mRNA in the LMC maintained in its tissue context and in cultured LMC. We used this probe to demonstrate the presence of transcripts of this receptor in cultured human cells, in particular in arterial CML and endothelial cells, as well as in monocytes and macrophages. Secondly, we studied the modulation of expression of this receptor by developing an in situ hybridisation technique. Using this approach, we were able to identify a large variability in the expression of this receptor during ontogenic development and ageing. In fact, in the aorta of the embryo and the newborn rat, P2y₂ mRNA is present in all the CMLs of the media, whereas in the adult the cells expressing this mRNA are less numerous and disseminated without preferential localisation. These cells acquire a distribution in the periphery of the media in the aged rat. Finally, we demonstrated strong expression of the P2y₂ receptor in the MLCs of experimental intimal lesions of the rat aorta induced by the passage of a balloon probe. This same approach enabled us to demonstrate the expression of transcripts of this receptor both in human atherosclerotic lesions and in lesions of restenosis after angioplasty, not only at the level of cml but also in the macrophages making up these lesions, thus confirming the observations made in culture. The work we have carried out has enabled us to create tools to improve our knowledge of the expression of this receptor in the MLC and in the normal or pathological arterial wall. Ongoing studies on this and other P2 receptors should make it possible to define the specific functions of these receptors and the role of extracellular nucleotides in the physiology and pathophysiology of the arterial wall.