ETUDE DES STRUCTURES FONCTIONNELLES DE L'ASPARTYL-TRNA SYNTHETASE. DETERMINATION DES BASES MOLECULAIRES DE LA RECONNAISSANCE ENZYME-SUBSTRATS / FRANCK MARTIN ; SOUS LA DIRECTION DE J. GANGLOFF

Date :

Editeur / Publisher : [S.l.] : [s.n.] , 1995

Format : 320 P.

Type : Livre / Book

Type : Thèse / Thesis

Langue / Language : français / French

Gangloff, Jacques (19.. -....) (Directeur de thèse / thesis advisor)

Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008) (Organisme de soutenance / degree-grantor)

Relation : ETUDE DES STRUCTURES FONCTIONNELLES DE L'ASPARTYL-TRNA SYNTHETASE. DETERMINATION DES BASES MOLECULAIRES DE LA RECONNAISSANCE ENZYME-SUBSTRATS / Franck Martin ; sous la direction de J. Gangloff / Grenoble : Atelier national de reproduction des thèses , 1995

Résumé / Abstract : CE MEMOIRE PORTE SUR L'ETUDE DES RELATIONS STRUCTURE-FONCTION DES AMINOACYL-TRNA STYNTHETASES (AARS). NOTRE ATTENTION S'EST FOCALISEE SUR L'ASPARTYL-TRNA SYNTHETASE (ASPRS) ; NOUS NOUS SOMMES ATTACHE A LOCALISER ET A CARACTERISER LES INTERACTIONS DE L'ASPRS AVEC SES TROIS SUBSTRATS A SAVOIR: L'ACIDE ASPARTIQUE, L'ATP ET SURTOUT LE TRNA#A#S#P. LA STRUCTURE CRISTALLOGRAPHIQUE DU COMPLEXE ASPRS-TRNA#A#S#P DE LA LEVURE SACCHAROMYCES CEREVISIAE A ETE RESOLUE ET L'ETUDE, PAR MUTAGENESE DIRIGEE, DES RESIDUS DE L'ASPRS LES PLUS CONSERVES AU SEIN DES ENZYMES DE LA CLASSE II ONT CONDUIT A UN MODELE MOLECULAIRE DU SITE ACTIF DE CETTE AARS DE LA CLASSE II. DANS UN DEUXIEME VOLET, NOTRE INTERET S'EST PORTE SUR L'ASPRS DE E.COLI ; PAR COMPARAISON AVEC L'ASPRS DE LEVURE, NOUS VOULIONS DETERMINER LE DEGRE DE CONSERVATION DES BASES MOLECULAIRES DE LA REACTION D'ASPARTYLATION AU COURS DE L'EVOLUTION. A CET EFFET, UNE ETUDE STRUCTURALE ET FONCTIONNELLE A ETE ENGAGEE SUR LE COMPLEXE ASPRS-TRNA#A#S#P DE E.COLI. LA STRUCTURE, RESOLUE DANS LE LABORATOIRE DU DR DINO MORAS, REVELE LA PRESENCE D'UN DOMAINE ADDITIONNEL INSERE ENTRE LES MOTIFS 2 ET 3, DE STRUCTURE GLOBULAIRE, SPECIFIQUE DES ASPRS PROCARYOTIQUES ; IL SEMBLE ETRE IMPLIQUE DANS DES INTERACTIONS AVEC LE TRNA AU NIVEAU DU BRAS ACCEPTEUR. PAR LA SUITE NOUS AVONS ABORDE L'ETUDE DE LA SPECIFICITE DE RECONNAISSANCE ENTRE LE TRNA#A#S#P ET L'ASPRS DE E.COLI. PAR UN CRIBLE GENETIQUE, DIX MUTANTS D'ASPRS CAPABLES DE CHARGER UN TRNA#A#S#PCUA ONT ETE SELECTIONNES. CES ETUDES ONT CONTRIBUE A LA VALIDATION DU MODELE STRUCTURAL DU COMPLEXE ASPRS-TRNA#A#S#P ELABORE DANS LE LABORATOIRE DU DR. DINO MORAS ET PLUS PARTICULIEREMENT DE PRECISER LE ROLE DE L'ANTICODON DANS LA SPECIFICITE DE RECONNAISSANCE DE L'ASPRS. UN AUTRE CRIBLE GENETIQUE NOUS A PERMIS D'ISOLER DES MOLECULES D'ASPRS AYANT CHANGE DE SPECIFICITE VIS A VIS DU TRNA, C'EST-A-DIRE CAPABLE DE RECONNAITRE LE TRNA#A#S#N#C#U#A. LA MAJORITE DE CES MUTANTS COMPORTENT DES DELETIONS PLUS OU MOINS IMPORTANTES DU DOMAINE N-TERMINAL CE QUI SUGGERERAIT LA PRESENCE D'ELEMENTS ANTIDETERMINANT DIRIGES CONTRE LE TRNA#A#S#N, DANS CETTE REGION DE LA PROTEINE. ENFIN, NOUS NOUS SOMMES INTERESSE A LA SPECIFICITE DE RECONNAISSANCE DES TRNA#A#S#P ET TRNA#A#S#N AU TRAVERS DE LEUR TRNA SUPPRESSEURS D'UN CODON AMBRE. DEUX CRIBLES GENETIQUES ONT CONDUIT A LA SELECTION DE 19 MUTANTS DE TRNA#A#S#N#C#U#A ET DE 15 MUTANTS DE TRNA#A#S#P#C#U#A ACTIFS IN VIVO. LES MUTANTS DE TRNA#A#S#N#C#U#A SONT EXCLUSIVEMENT AMINOACYLES PAR LA GLNRS ALORS QUE LES MUTANTS DU TRNA#A#S#P#C#U#A SONT RECONNUS PAR LA LYSRS, L'ALARS, LA GLNRS ET L'ARGRS. CES ETUDES ONT CONFIRME LE ROLE DE PLUSIEURS NUCLEOTIDES DANS L'IDENTITE DE L'ALANINE (G3-U70), L'ARGININE (A20), LYSINE (U35) ET GLUTAMINE (U35 ET PAIRE DE BASE 1-72) ET ONT SUGGERE L'EXISTENCE D'AUTRES ELEMENTS D'IDENTITE POUR LA LYSRS ET L'ALARS